Филтри флуоресцентӣ ҷузъи муҳими микроскопи флуоресцентӣ мебошад. Системаи маъмулӣ дорои се филтри асосӣ мебошад: филтри барангезанда, филтри эмиссия ва оинаи дихроикӣ. Онҳо одатан дар як мукааб бастабандӣ карда мешаванд, то гурӯҳ якҷоя ба микроскоп ворид карда шаванд.
Филтри флуоресцентӣ чӣ гуна кор мекунад?
Филтри ҳаяҷонбахш
Филтрҳои ҳаяҷонбахш нури дарозии мавҷи мушаххасро интиқол медиҳанд ва дарозии мавҷҳои дигарро маҳкам мекунанд. Онҳоро барои тавлиди рангҳои гуногун тавассути танзими филтр истифода бурдан мумкин аст, то танҳо як ранг гузарад. Филтрҳои ҳаяҷонбахш дар ду намуди асосӣ мавҷуданд - филтрҳои интиқоли дароз ва филтрҳои гузариш. Барангезанда одатан як филтри гузаранда мебошад, ки танҳо дарозии мавҷҳои аз ҷониби флюорофор ҷаббидашуда мегузарад ва ба ин васила ҳаяҷонангези дигар манбаъҳои флуоресцентро кам мекунад ва нури ҳаяҷонбахшро дар банди флуорессенсия манъ мекунад. Тавре ки дар хати кабуд дар расм нишон дода шудааст, BP 460-495 аст, ки маънои онро дорад, ки он метавонад танҳо аз флуоресценти 460-495 нм гузарад.
Он дар дохили роҳи равшании микроскопи флуоресцентӣ ҷойгир карда шудааст ва тамоми дарозии мавҷҳои манбаи рӯшноиро ба истиснои диапазони барангезиши флюорофор филтр мекунад. Интиқоли ҳадди ақали филтр равшанӣ ва дурахши тасвирҳоро дикта мекунад. Интиқоли ҳадди аққал 40% барои ҳама гуна филтри ҳаяҷоновар тавсия дода мешавад, то интиқоли идеалӣ >85% бошад. Маҷрои филтри барангезанда бояд комилан дар доираи ҳаяҷонбахши флюорофор бошад, то дарозии мавҷи марказии филтр (CWL) то ҳадди имкон ба дарозии авҷи мавҷҳои ҳаяҷонбахши флюорофор наздик бошад. Зичии оптикии филтри ҳаяҷонбахш (OD) торикии тасвири заминаро дикта мекунад; OD ченакест, ки то чӣ андоза филтр дарозии мавҷҳоро берун аз доираи интиқол ё фарохмаҷро маҳкам мекунад. Ҳадди ақали OD 3.0 тавсия дода мешавад, аммо OD аз 6.0 ё бештар аз он беҳтарин аст.
Филтри эмиссия
Филтрҳои эмиссия ба ҳадафи он хидмат мекунанд, ки флуорессенсияи дилхоҳ аз намуна ба детектор бирасанд. Онҳо дарозии мавҷҳои кӯтоҳтарро маҳкам мекунанд ва барои дарозии мавҷҳои дарозтар интиқоли баланд доранд. Навъи филтр инчунин бо адад алоқаманд аст, масалан BA510IF дар расм (филтри монеаи дахолат), ки ин нишондод ба дарозии мавҷ дар 50% интиқоли максималии он ишора мекунад.
Ҳамин тавсияҳо барои филтрҳои ҳаяҷонбахш барои филтрҳои эмиссия дурустанд: интиқоли ҳадди ақал, фарохмаҷро, OD ва CWL. Филтри эмиссия бо CWL идеалӣ, интиқоли ҳадди ақал ва комбинатсияи OD тасвирҳои равшантарини имконпазирро бо бастани амиқтарин таъмин мекунад ва ошкор кардани сигналҳои заифтаринро таъмин мекунад.
Зеркало Дихрой
Оинаи дихроӣ дар байни филтри барангезанда ва филтри эмиссия дар кунҷи 45 ° ҷойгир карда шудааст ва ҳангоми интиқоли сигнали эмиссия ба детектор сигнали барангезандаро ба сӯи флюорофор инъикос мекунад. Филтрҳои идеалии дихроикӣ ва тақсимкунандагони чӯб байни инъикоси максималӣ ва интиқоли максималӣ гузариши шадид доранд, бо инъикоси >95% барои фарохмаҷрои филтри барангезанда ва интиқоли>90% барои фарохмаҷрои филтри эмиссия. Филтрро бо дарозии мавҷҳои чорроҳаи (λ) флюорофорро дар назар интихоб кунед, то нури гумроҳшударо кам кунед ва таносуби тасвири флюоресцентиро ба ҳадди аксар расонанд.
Оинаи дихроикӣ дар ин расм DM505 мебошад, ки бо сабаби он номгузорӣ шудааст, ки 505 нанометр дарозии мавҷ дар 50% интиқоли ҳадди аксар барои ин оина аст. Хатти интиқоли ин оина интиқоли баландро аз 505 нм, коҳиши шадиди интиқол ба чапи 505 нанометр ва инъикоси максималӣ ба чапи 505 нанометрро нишон медиҳад, аммо ба ҳар ҳол метавонад каме интиқолро аз 505 нм дошта бошад.
Фарқи байни филтрҳои интиқоли дароз ва гузариши гурӯҳӣ чӣ гуна аст?
Филтрҳои флуоресцентиро ба ду намуд тақсим кардан мумкин аст: гузариш дароз (LP) ва гузариш банд (BP).
Филтрҳои гузариши дароз дарозии мавҷҳоро интиқол медиҳанд ва кӯтоҳтарро маҳкам мекунанд. Дарозии мавҷҳои буридашуда қимат дар 50% интиқоли қулла аст ва тамоми дарозии мавҷҳои болои буриш тавассути филтрҳои гузариши дароз интиқол дода мешаванд. Онҳо аксар вақт дар оинаҳои дихронӣ ва филтрҳои эмиссия истифода мешаванд. Филтрҳои дарозгузар бояд вақте истифода шаванд, ки барнома ҷамъоварии ҳадди ниҳоии партовҳоро талаб мекунад ва вақте ки табъизи спектралӣ матлуб ё зарур нест, ки ин одатан барои зондҳое, ки як намуди партобкунанда дар намунаҳо бо сатҳи нисбатан пасти автофлуорессенси замина тавлид мекунанд, истифода мешавад.
Филтрҳои гузариш танҳо як банди дарозии мавҷро интиқол медиҳанд ва дигаронро маҳкам мекунанд. Онҳо бо роҳи интиқоли танҳо қавитарин қисми спектри партобҳои флюорофорро коҳиш медиҳанд, садои автофлуоресцентро коҳиш медиҳанд ва ба ин васила таносуби сигнал ба садоро дар намунаҳои автофлуорессенси заминаҳои баланд, ки филтрҳои гузариши дароз пешниҳод карда наметавонанд, беҳтар мекунанд.
Чанд намуди маҷмӯаҳои филтрҳои флуоресцентии BestScope метавонанд таъмин карда шаванд?
Баъзе намудҳои маъмули филтрҳо филтрҳои кабуд, сабз ва ултрабунафшро дар бар мегиранд. Чунон ки дар чадвал нишон дода шудааст.
| Маҷмӯи филтр | Филтри ҳаяҷонбахш | Зеркало Дихрой | Филтри монеа | Лампаи LED Дарозии мавҷ | Ариза |
| B | BP460-495 | DM505 | BA510 | 485нм | ·FITC: Усули антителоҳои флуоресцентӣ · Норанҷии кислотаи: ДНК, РНК · Аурамин: микробҳои сил ·EGFP, S657, RSGFP |
| G | BP510-550 | DM570 | BA575 | 535нм | · Rhodamine, TRITC: Усули антитело флуоресцентӣ · Йодид пропидиум: ДНК · RFP |
| U | BP330-385 | DM410 | BA420 | 365нм | · Мушоҳидаи автоматии флуоресцентӣ ·DAPI: ранг кардани ДНК · Hoechest 332528, 33342: барои ранг кардани хромосома истифода мешавад |
| V | BP400-410 | DM455 | BA460 | 405нм | · катехоламинҳо · 5-гидрокситриптамин · Тетрациклин: скелет, дандон |
| R | BP620-650 | DM660 | BA670-750 | 640нм | ·Cy5 · Alexa Fluor 633, Alexa Fluor 647 |
Маҷмӯаҳои филтрҳо, ки дар ба даст овардани флуоресцентҳо истифода мешаванд, дар атрофи дарозии мавҷҳои асосии дар барномаҳои флуоресцентӣ истифодашаванда тарҳрезӣ шудаанд, ки дар атрофи флюорофорҳои бештар истифодашаванда асос ёфтаанд. Аз ин сабаб, онҳо инчунин бо номи флюорофоре, ки барои тасвир пешбинӣ шудаанд, ба монанди кубҳои филтрҳои DAPI (кабуд), FITC (сабз) ё TRITC (сурх) номгузорӣ шудаанд.
| Маҷмӯи филтр | Филтри ҳаяҷонбахш | Зеркало Дихрой | Филтри монеа | Лампаи LED Дарозии мавҷ |
| FITC | BP460-495 | DM505 | BA510-550 | 485нм |
| DAPI | BP360-390 | DM415 | BA435-485 | 365нм |
| TRITC | BP528-553 | DM565 | BA578-633 | 535нм |
| FL-Аурамин | BP470 | DM480 | BA485 | 450нм |
| Техас Сурх | BP540-580 | DM595 | BA600-660 | 560нм |
| mCherry | BP542-582 | DM593 | BA605-675 | 560нм |
Чӣ тавр шумо филтри флуоресцентиро интихоб мекунед?
1. Принсипи интихоби филтри флуоресцентӣ ин аст, ки бигзор нури флуорессенсия/эммиссия аз охири тасвир то ҳадди имкон гузарад ва нури барангезандаро дар як вақт комилан маҳкам кунад, то таносуби баландтарини сигнал ба садо ба даст ояд. Махсусан барои татбиқи ҳаяҷонбахши мултифотонӣ ва микроскопи умумии инъикоси дохилӣ, садои заиф инчунин ба эффекти тасвир халал мерасонад, бинобар ин талабот ба таносуби сигнал ба садо баландтар аст.
2. Спектри барангезиш ва партови флюорофорро донед. Барои сохтани маҷмӯи филтри флуоресцентӣ, ки тасвири баландсифат ва контрасти дорои заминаи сиёҳро тавлид мекунад, филтрҳои ҳаяҷонбахш ва эмиссия бояд интиқоли баландро бо мавҷи гузариши ҳадди аққал дар минтақаҳое, ки ба қуллаҳои ҳаяҷонбахш ё партовҳои флюорофор мувофиқанд, ба даст оранд.
3. Давомнокии филтрҳои флуоресцентиро баррасӣ кунед. Ин филтрҳо бояд ба манбаъҳои шадиди рӯшноӣ, ки нурҳои ултрабунафшро тавлид мекунанд, тобовар бошанд, ки метавонад ба “сӯхташавӣ”, бахусус филтри барангезанда оварда расонад, зеро он ба шиддати пурраи манбаи равшанӣ дучор мешавад.
Тасвирҳои гуногуни флуоресцентӣ
Захираҳо дар Интернет ҷамъоварӣ ва ташкил карда мешаванд ва танҳо барои омӯзиш ва муошират истифода мешаванд. Агар ягон қонунвайронкуние вуҷуд дошта бошад, лутфан бо мо тамос гиред, то нест кунед.
Вақти интишор: Декабри 09-2022